分子生物學的研究方法及其應用

分子生物學的研究方法在現代醫學，法醫學，以及生物學的重要作用。 由於在DNA和RNA的研究進展，人是能夠探索生物體的基因組中確定的病原體，以識別所期望的核酸中的酸等的混合物

分子生物學的方法。 這是什麼？

早在科學家的70-80s是第一個破譯 人類基因組。 這一事件推動了基因工程和分子生物學的發展。 研究DNA和RNA的特性意味著現在可以使用這些核酸用於疾病診斷，研究基因的目的。

DNA和RNA的製備

分子生物學 診斷方法 需要原料：經常此 核酸。 有幾種方法可以選擇：生物的細胞中這些物質。 每個人都有其優點和缺點，並且應該在選擇以純的形式分離核酸的方法時，必須考慮。

1. Marmur製備的DNA。 該方法包括在治療的醇物質混合物，沉澱物所得純DNA。 這種方法的缺點是使用腐蝕性物質，苯酚和氯仿的。

2.分離在懸臂的DNA。 在此使用的主要物質 - 是硫氰酸胍（異硫氰酸胍）。 它促進沉積脫氧核糖核酸上專門底物，從它可以通過一個特殊的緩衝器來隨後收集。 然而異硫氰酸胍 - 是TCP的抑製劑，並且，即使一小部分被存放在DNA可以影響聚合酶鍊式反應，與核酸工作時這是重要的過程。

3.沉澱的雜質。 該方法不同於以前的，所述分子本身不沉積dehoksiribonukleinovoy酸和雜質。 要做到這一點，使用離子交換劑。 其缺點是，並不是所有的物質可以擺平。

4.普查。 這種方法在使用的情況下，當你不需要有關於DNA分子的結構，並且需要得到一些統計數據的準確信息。 其原因是，核酸結構可以處理洗滌劑，特別是鹼時被損壞。

研究方法分類

所有研究分子生物學方法分為三大類：

1.擴增（使用多個酶）。 這包括PCR - 聚合酶鏈反應，這在許多的診斷方法中起著重要的作用。

2. Neamplifikatsionnye。 這組方法是直接與核酸的混合物的工作相關聯。 實例3種印跡，原位雜交等

3.方法基於這樣的認識，從所述探針分子，其結合到一個特定的DNA或RNA探針的信號的。 實施例 - 雜交系統HYBRIDE捕捉系統溶液（HC2）。

可在分子生物學的研究方法來使用的酶

許多分子診斷技術包括使用的寬範圍的酶。 下面是最常用的：

1.限制酶 - “切”的DNA分子，以必要的零件。

2. DNA聚合酶 - 合成雙鏈脫氧核糖核酸分子。

3.逆轉錄酶（逆轉錄酶） - 用於從RNA模板合成DNA。

4. DNA連接酶 - 負責的核苷酸之間磷酸二酯鍵的形成。

5.核酸外切酶 - 從脫氧核糖核酸分子的端部去除核苷酸。

PCR - 擴增DNA的基本方法

聚合酶鏈反應（PCR） 被廣泛用於現代分子生物學。 該方法中，其中單個DNA分子能夠獲得副本（放大分子）的大量。

PCR的主要功能：

- 診斷疾病;

- 克隆的DNA片段，基因。

為了進行聚合酶鏈反應需要以下元件：初始DNA分子，熱穩定的DNA聚合酶（Taq酶或PFU），脫氧核糖核苷酸磷酸鹽（的氮鹼源），引物（2引物1的DNA分子）和本身的緩衝系統，其可進行所有的反應。

PCR包括三個步驟：變性，引物退火和延伸。

1.變性。 在94-95攝氏度proshodit的溫度下斷裂DNA的兩條鏈之間的氫鍵，並且作為結果，我們得到兩個單鏈分子。

2.退火的引物。 在50-60攝氏度的溫度出現在根據互補的類型的單鏈核酸分子的末端加入引物。

3.伸長率。 在72度的溫度下合成的女兒雙鏈脫氧核糖核酸分子。

DNA測序

分子生物學的研究方法往往需要核苷酸序列的知識脫氧核糖核酸的分子。 為了確定 遺傳密碼 測序。 未來的分子診斷將基於人類基因組序列的測定獲得的知識。

以下類型的排序：

• 通過馬克薩姆 - 吉爾伯特測序;
• Sanger測序;
• 焦磷酸測序;
• nanoporovoe測序。